期刊：JHEPReports 影响因子：95

伯豪技术服务产品：伯豪单细胞测序服务、伯优®单细胞测序组织保存液

导语

肝脏是一个具有独特免疫特性和对食源性抗原耐受性的特殊器官。新生儿接触HBV后易发生慢性感染，而成年人的急性感染则表明肝组织微环境中的免疫细胞能有效对抗病毒。然而，关于急性HBV感染机制的研究仍相对不足。在本研究中，我们利用急性HBV模型小鼠，发现了一种具备T细胞和巨噬细胞特征的巨噬细胞群，揭示了这些巨噬细胞在HBV清除中的重要作用。此外，我们证实该群体是在病毒特异性T细胞和抗体存在时从巨噬细胞衍生而来，彰显了肝脏微环境中抗病毒免疫反应的复杂性。

主要技术

采用的主要技术包括scRNA-seq、免疫组化、细胞培养、流式分选，以及伯优®单细胞测序组织保存液（以上技术服务产品由尊龙凯时提供）。

研究结果

1. HBV小鼠肝脏微环境中免疫细胞的单细胞分析

所有HBV小鼠肝脏中的免疫细胞被鉴定为24个簇，包括B细胞、巨噬细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、粒细胞、树突状细胞等（依据星戈勒软件注释）。标志性基因分别标识了不同种类的免疫细胞，例如Cd79a（B细胞和浆细胞）、Csf1r（巨噬细胞）、Cd8a（CD8+ T 细胞）等。

2. HBV小鼠模型中髓系来源的细胞组成

单核细胞源性巨噬细胞被细分为三个亚群，而组织驻留的Kupffer细胞被细分为四个亚群。值得注意的是，在HBV快速清除的小鼠中，单核细胞和粒细胞-1在第3天时急剧增加。

3. HBV清除过程中肝内CD3+Kupffer细胞的鉴定

不仅Clec4f基因，在Kupffer-cluster2中还观察到CD3e和CD8a的高表达，表明这些细胞与巨噬细胞相似，并呈现出不规则的形态特征。进一步的实验确认了CD3+巨噬细胞的存在，并证实了该细胞群在急性乙型肝炎患者中的特殊性。

4. 通过抗原、抗体和抗原特异性T细胞的综合作用产生CD3+巨噬细胞

为了证实CD3+巨噬细胞是否由HBsAg特异性CD8+ T细胞和肝内巨噬细胞相互作用产生，我们进行了一系列共培养实验，发现HBsAg与抗HBsAg抗体的联合作用极大地诱导了CD3+巨噬细胞的生成。

5. CD3+巨噬细胞的长效驻留特性

研究结果显示，HBV清除后CD3+巨噬细胞的数量并没有立即消失，而是在HBsAg水平降低的过程中保持了一定的比例，这一发现显示了其在肝脏免疫反应中的长效性质。

6. CD3+巨噬细胞的多功能性

CD3+巨噬细胞展现出了强大的功能，通过分析显示其在培养时可表达多种促炎因子，进而促进HBV的清除。这进一步验证了其在体内的免疫调节作用，为未来治疗慢性乙型肝炎提供了新的思路。

总结

本研究通过对HBV暴露小鼠肝脏免疫微环境的深入分析，揭示了长期驻留的CD3+巨噬细胞在清除HBV中的重要作用，强调了肝内免疫应答在抗病毒过程中的关键性。这为慢性乙型肝炎的治疗提供了新的潜在策略，强尊龙凯时亦将在此领域持续推进研究。