猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒使用说明书

产品名称： 通用名称：猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法） 英文名称： Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格：50T/盒

预期用途： 本试剂盒基于实时荧光PCR原理，旨在定性检测猪蓝耳病病毒，为猪蓝耳病的诊断及疗效评估提供重要指导。

原理： 该试剂盒通过针对猪蓝耳病病毒高度保守区域的特异性引物和探针，在PCR反应中检测猪蓝耳病病毒基因组模板，从而释放荧光信号。借助荧光定量PCR仪实时监测反应信号，实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成： 1. PRRSV RT-PCR反应液：875 μL × 1管 2. PRRSV混合酶液：125 μL × 1管 3. PRRSV阳性对照：40 μL × 1管 4. PRRSV阴性对照：40 μL × 1管 5. 说明书：1份 注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪蓝耳靶基因的质粒。

储存条件及有效期： 本试剂盒应避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器： 适用于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

样本要求： 1. 血液或血清样品：使用无菌注射液抽取，并置于离心管中待检。 2. 肺脏、淋巴结和脾脏样品：取样本20g，加入少量灭菌PBS，用无菌研磨器研磨至糊状，然后用4倍体积的PBS稀释，8000rpm 4℃离心10分钟，取上清待检。 3. 应避免标本间的交叉污染。 4. 样本收集后可立即检测，若不能立即检测，可置于2-8℃冷藏过夜，长期保存应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

检验方法： 1. 试剂准备（试剂准备区）： 从冰箱中取出试剂盒，取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。计算反应数（n），并根据需要的反应体系计算试剂量。 - RT-PCR反应液：175 μL - 混合酶：25 μL 在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后再瞬时离心，然后按20 μL/管的分装量将试剂分装至PCR反应管。

2. 样本准备（样本处理区）： 使用QIAGEN或Roche RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作请遵循相关操作说明。

3. 加样： 在PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μL，终体积为25 μL/管，盖好PCR反应盖并混匀，瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性和阳性对照管各加5 μL试剂盒提供的对照品，终体积同样为25 μL/管。

4. PCR（PCR扩增区）： 将准备好的PCR反应管放入实时荧光定量PCR仪样品槽，并记录放置顺序。根据提供的表格设置核酸扩增的相关参数进行PCR扩增。

参考值（参考范围）： 试剂盒的有效性可通过阳性和阴性对照及标本结果进行判定，具体条件详见说明书。

检验结果的解释： 对应的检测结果解释根据荧光信号强度（FAM通道）分别判断样本是否含有猪蓝耳病病毒。

检验方法的局限性： 1. 当样本核酸浓度低于最低检出限时，可能会导致假阴性结果。 2. 处理不当可能导致RNA降解，从而产生假阴性结果。 3. 样本过程中的交叉污染可导致假阳性结果。

产品性能指标： 本试剂盒的最低检出限为103 Copies/mL，CV值≤3%。

注意事项： 1. 使用本试剂盒的实验室应遵循国家相关基因扩增检验实验室管理规范。 2. 避免RNA降解，样本处理应在0-4℃进行，实验后即上机检测，所用器具应经无核酶处理。 3. 各区域物品不可交叉使用，为避免污染，应立即对工作台进行清洁。 4. 吸取反应液时，应小心避免气泡。 5. 所有试剂在使用前应先在常温下充分融化并瞬时离心。 6. 检测结束后，应妥善处理废弃物品，并使用适当的消毒措施。

通过使用尊龙凯时的猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒，您可以获得高效、准确的检测结果，为您的猪只健康提供强有力的保障。