尊龙凯时提供了一份详尽的人多能干细胞（hPSC）培养和操作指南，旨在帮助科研人员高效进行细胞培养和传代实验。以下是实验准备和操作步骤的详细说明。

一、实验准备

尊龙凯时 为人多能干细胞培养基的配制提供了清晰的指导：

1. 将hPSC Medium Supplement在2-8℃下解冻，融化后轻轻晃动以确保混匀，按需分装后立即使用或储存于-20至-80℃，避免反复冻融。
2. 按1:50的比例，将10mL的hPSC Medium Supplement添加到500mL的hPSC Medium Basal Medium中，混合均匀，即可得到人多能干细胞培养基（abs9403）。注意，混合后的培养基可在2-8℃下稳定储存2-3周，但不建议使用超过3周的培养基。
3. 在实验前，将人多能干细胞培养基置于室温避光条件下平衡，同时将PBS和消化液加热至37℃。注意：培养基中的活性因子不能使用37℃水浴加热。

二、操作方法（所有步骤应在无菌条件下进行）

hPSC细胞复苏

1. 基质胶包被培养板：从冰箱取出6孔或12孔培养板，每孔加入1mL或0.5mL的即用型基质胶（abs9410），轻晃以确保底部完全覆盖，然后将其放置于37℃培养箱中孵育1-2小时。若不立即使用，可用Parafilm封口后储存于2-8℃，并在1周内使用。
2. 先将2-3mL的干细胞培养基加入15mL离心管中备用。
3. 解冻：将冻存管快速浸入37℃温水中摇动，使其在1-2分钟内迅速解冻，减少细胞暴露于室温的时间。
4. 离心：将冻存管内的解冻液逐滴加入干细胞培养基的15mL离心管中，放入低速离心机中平衡后以1000rpm离心3分钟。
5. 重悬：离心后弃去上清，加1mL人多能干细胞培养基，对沉淀进行轻柔吹吸混匀，建议进行3-5次。
6. 接种：均匀吹打后弃掉已平衡的即用型基质胶，将干细胞悬液加入到已经包被的6孔板中，补全每孔2mL培养基。
7. 培养：接种后可在倒置相差显微镜下观察干细胞的分布和团块大小，团块不少于4个细胞为合格。在37℃、5% CO2的恒温培养箱中培养，第二天观察细胞的贴壁情况。
8. 换液：从复苏开始每24小时更换一次培养基，以确保活性成分的充足。

hPSC细胞传代

1. 清洗：吸去原有培养基，缓慢加入1mL PBS并轻轻晃动，沿边缘吸去PBS。
2. 消化：在6孔板中加入2mL人多能干细胞消化液（abs9409）覆盖底部，置于37℃培养箱中消化2-5分钟，根据细胞生长密度调整消化时间。
3. 吹打：吸掉消化液后，加入2mL干细胞培养基，轻柔吹打3-5次以使细胞脱落并转移至15mL离心管中。
4. 离心：1000rpm离心3分钟，弃去上清。
5. 接种：将细胞悬液加入包被培养板中，并补全每孔2mL的培养基。
6. 换液：从传代开始每24小时更换一次培养基。

hPSC细胞冻存

1. 清洗：同hPSC细胞传代步骤1。
2. 消化：同hPSC细胞传代步骤2。
3. 吹打：同hPSC细胞传代步骤3。
4. 离心：同hPSC细胞传代步骤4。
5. 重悬：加入2mL的冻存液（abs9412）对细胞沉淀进行吹吸混匀后转移至冻存管中。
6. 记录：在冻存管上标记细胞种类、日期和操作者信息。
7. 冻存：将冻存管放置于-80℃冰箱过夜，确保管子直立放置，不可斜放或横放。
8. 24小时后，将细胞转移至液氮进行长期冻存。

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