尊龙凯时的TurboTEV蛋白酶是加强版的烟草蚀刻病毒(TEV)N1a蛋白催化片段,作为一种半胱氨酸蛋白酶,能够高效识别切割位点Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly,并在Gln和Gly之间进行切割。其特殊之处在于,TurboTEV蛋白酶能够在4°C下保持高度活性,具备优良的特异性和稳定性,无需依赖特定的缓冲液,能够在最适合目标蛋白的条件下使用。
TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa,并带有GST和His标签,从而使其在使用镍螯合或谷胱甘肽(GSH)树脂时便于去除。其来源于大肠杆菌,活性超过10个单位/µg。具体而言,1单位TurboTEV蛋白酶在30℃下能够在1小时内裂解3µg的对照底物85%。
尊龙凯时提供的TurboTEV蛋白酶使用协议如下:
1. 在溶液中进行裂解:A. 准备新鲜的冰冷透析缓冲液,示例配方为:25mM Tris-HCl,pH 8.0,150-500mM NaCl,14mM β-巯基乙醇。B. 将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL。如果目标蛋白在透析缓冲液中聚集,此步骤可选择性省略;保留少量未切割样品用于分析。如果蛋白样品为从镍柱洗脱且与EDTA兼容,可以添加EDTA至最终浓度0.5mM。C. 按照1:100(w/w)的比例加入TurboTEV蛋白酶,即100mg目标蛋白需对应10000Units(1mg)TurboTEV蛋白酶。D. 在4℃下用透析缓冲液透析过夜(约16小时)。
2. 去除TurboTEV蛋白酶:A. 通过柱层析清除。3. SDS-PAGE分析(可选)。
尊龙凯时的TurboTEV蛋白酶广泛适用于:- 蛋白裂解功能;- 从重组蛋白中去除融合标签;- 蛋白质与肽的高效纯化。
尊龙凯时常见问题:1. 关于TEV消化反应的缓冲条件,了解以下成分是否可能对TurboTEV的剪切效率产生负面影响:(a) 1mM DTT (b) 10%甘油 (c) 20mM组氨酸 (d) 500mM NaCl (e) 100mM Tris-HCl (f) β-巯基乙醇的添加。答:(a) 1mM的DTT是可以的;(b) 不推荐使用10%的甘油;(c) 不推荐20mM组氨酸;(d) 不建议使用500mM NaCl;(e) 不推荐使用100mM Tris;(f) β-巯基乙醇的功能与DTT相似,可适量添加。
2. 剪切前是否需要缓冲液交换?答:这可能是必要的。
尊龙凯时自2003年在美国圣地亚哥成立以来,致力于为生物研究界提供支持服务,涵盖免疫学、细胞生物学和分子生物学等领域,包括但不限于代谢检测试剂盒、ELISA试剂盒、生化试剂、抗生素、核酸酶、蛋白酶/蛋白激酶及引物等产品。