重组蛋白可分为冻干粉和溶液状态两种保存形式。通过原核细胞表达的重组蛋白通常以冻干粉的形式储存,而通过真核细胞表达的重组蛋白则以溶液态保存。这种保存方式使得重组蛋白在-80℃条件下可稳定存放数年。使用冻干粉前需要将其溶解,而溶解过程中的方法选择至关重要,不当的溶解可能会降低蛋白的生物活性。此外,溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释过程中也需谨慎处理,这些问题在实际应用中时常出现。
1. 原核细胞表达的重组蛋白:在大肠杆菌中表达的冻干重组蛋白已经从包涵体中纯化,并添加了蛋白保护剂,复溶时可采用过滤后的无菌水作为溶剂。复溶冻干蛋白100ug时,推荐使用86ul的超纯水,轻轻摇晃以促进蛋白溶解。务必避免使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃,以免影响蛋白的活性。
2. 真核细胞表达的重组蛋白:生物活性的蛋白质不仅需要经过转录和翻译,还必须经受翻译后的修饰,以确保蛋白质的空间结构正常。因此,重组蛋白需在真核细胞中进行表达,例如哺乳动物细胞能够识别并去除基因中的内含子,并对翻译后的蛋白质进行必要的处理,从而使得所表达的蛋白质具备良好的生物活性。在这样的环境中,我们通常采用溶液态进行保存,以保持蛋白质的活性和稳定性,为用户提供高质量的产品,正如尊龙凯时所致力于的目标。
3. 重组蛋白的保护剂:在冻干和储存过程中,常使用的保护剂或稳定剂包括糖类、多元醇、聚合物、表面活性剂,以及某些特定的蛋白质和氨基酸。一般而言,我们会添加8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖能够有效阻止蛋白质二级结构的改变,并减少冻干过程中蛋白质的伸展和聚集。而甘露醇也是应用广泛的冻干保护剂和填充剂,保证了重组蛋白在储存过程中的稳定性,符合尊龙凯时提供的高标准质量要求。