尊龙凯时细胞培养技术以及注意事项

在进行细胞培养时，培养条件至关重要。对于人类黑色素瘤细胞A875，其推荐的气相组成为95%空气和5%二氧化碳，培养温度应保持在37℃。A875细胞系源自人类皮肤癌，并广泛应用于肿瘤生物学研究、药物筛选及癌症机制探讨。该细胞系经过短串联重复序列（STR）鉴定，确保了其遗传特征的稳定性与细胞株的真实性。

传代方法

首次传代建议采用1:2比例。每两天需更换培养液；为保证细胞的健康状态，建议同时购买完整培养基，避免在细胞培养期间出现不必要的影响。当收到细胞后，请勿立即开启瓶盖，及时核对培养瓶上的细胞名称与订单一致性，以及是否有破损或泄漏等异常情况。

若未发现异常，请在显微镜下观察细胞状态，并拍照记录，尤其是前三天的细胞状态照片将作为重要的售后依据。如果未提供照片，将默认细胞状态良好。

贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，于37℃培养箱中孵育1-2分钟，观察细胞消化情况。如细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吸出脱落的细胞，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补充1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶（两个T25瓶），并补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放回37℃、5%CO2的培养箱中继续培养。

悬浮细胞的传代步骤：

1. 采用半换液法，竖放培养瓶在培养箱静置1小时左右，轻吸去约3ml培养基，然后补充3ml完全培养基；若培养基变色较慢，可直接加入约500ul FBS。当传代时可直接补给5ml培养基并分入2个培养瓶中。通常这样传代约3次后可进行一次离心去除死细胞。

2. 离心换液法，如需分瓶可将细胞悬液收集到离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养液后重悬混匀，再按1:2比例分入新T25瓶中，添加6-8ml新准备的完全培养基，以保持细胞活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5比例进行。

细胞冻存步骤：

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，使用PBS冲洗细胞；

2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩并变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞完全脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中；

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱可保存。如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱存放超过24小时后再转入液氮罐。

细胞复苏步骤：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻至无结晶后，用75%酒精擦拭管外；

2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；

3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种于T25培养瓶，放入37℃，5%CO2培养箱中；

4. 第二天更换为新鲜完全培养基，继续培养。

注意事项：

请注意，有些细胞在运输过程中可能会出现脱落现象，属正常情况。如脱离较多，建议将培养液收集至离心管，在1000rpm离心5分钟后，使用沉淀入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心，弃上清，补充1-2ml完全培养基重悬。最终按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

细胞问题处理标准：

1. 重发情况包括细胞在运输途中的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等，及细胞污染问题需在收到48小时内反馈；

2. 如常温运输的细胞在静置24小时后、干冰运输的细胞在复苏后未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片；

3. 若细胞被认为状态不良，需在收到后7天内提供真实实验结果，以及前三天的照片和操作步骤以供核实；

4. 细胞出现问题不予重发的情况包括客户造成的污染、错误操作导致细胞状态不佳等。

通过正确的操作与遵循上述细则，可有效提高培养成功率。选择尊龙凯时，为您的细胞培养提供优质保障。