尊龙凯时提供的人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养说明书将为您详细介绍细胞培养的各项注意事项和步骤，以确保您能够高效、准确地进行实验。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

贴壁传代方法：第一次建议1:2传代

传代情况：每2天换液

备注：使用无菌离心管收集培养基，以供过渡对比。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞收到后，培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后放入超净台中进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时，以稳定细胞状态再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍照保存（推荐40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若不提供照片，默认收到状态良好。建议传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一个瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后将瓶盖拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果未超过80%汇合度，将瓶装的完全培养液收集至离心管，留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代，传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，重悬1-2ml完全培养基。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态。待细胞收缩后，加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，并转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

弃去上清后，沉淀细胞并加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱内保存，如需转入液氮罐中，需在-80℃下存放超过24小时后再转入。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞贴壁不牢，运输过程中可能发生脱落，此为正常现象。如脱落较多，可将培养瓶内培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清用于过渡培养。沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再次离心，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。接着按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中。

五、售后条款

1）细胞出现问题时，可重发的情况及判定标准：

1. 运输过程中遇到细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题，符合条件的可重发；
2. 如细胞受到污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰运输的细胞复苏后24小时内，若细胞大多数未存活需提供真实清晰的细胞状态照片，可重发；
4. 若干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后并未开封出现污染，符合条件的可重发；
5. 如出现细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后重发；
6. 收到细胞当天以及第2、3天请拍照，若未在3天内告知，视为产品合格。若4-7天内出现问题，需提供前三天照片及相关操作详细步骤，技术人员判断如属于我方责任可重发。若为双方责任则需按合同协商解决。

2）细胞出现问题时，不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染不予重发；
2. 错误操作导致细胞状态不佳不予重发；
3. 非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳不予重发；
4. 细胞未提供培养前3天照片的情况下状态不佳不予重发；
5. 细胞培养过程中进行其它处理不予重发；
6. 收到细胞2天内未告知的情况不予重发；
7. 视具体情况而定。

选择尊龙凯时，确保您的细胞培养过程顺利无忧，体验优质的生物医疗产品与服务。