尊龙凯时猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）说明书

产品信息

产品名称：猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格：50T/盒

预期用途

本试剂盒采用实时荧光PCR技术，旨在定性检测猪流感病毒。这对猪流感病毒引发的流感及其并发症的诊断和治疗效果评估具有重要的指导意义。

原理

该试剂盒设计了针对猪流感病毒高度保守区域的特异性引物和探针。当反应体系中含有猪流感病毒基因组模板时，PCR反应将释放荧光信号。使用荧光定量PCR仪实时监测和输出相应信号，从而实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成

本试剂盒包括以下成分：

• SIV RT-PCR反应液：875 μL × 1管
• SIV混合酶液：125 μL × 1管
• SIV阳性对照：40 μL × 1管
• SIV阴性对照：40 μL × 1管
• 说明书：1份

注：阴性对照使用灭菌纯水，阳性对照为含有猪流感病毒靶基因的质粒。

储存条件及有效期

应避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，产品有效期为12个月。

适用仪器

适用于以下多通道实时荧光定量PCR仪：ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等。

样本要求

1. 样本采集须注意：
(1) 咽喉拭子：深入喉头与上颚裂刮取3至5次，以获取咽喉分泌液；
(2) 鼻拭子：深入鼻腔及周围采集分泌液；
(3) 将咽喉和鼻拭子放入含10mL生理盐水的离心管中备用；
(4) 推荐使用合成纤维拭子配合铝或塑料杆，不推荐棉拭子和木杆。

2. 血液或血清样本需用无菌注射器抽取，置于离心管中待检。

3. 样本采集管需含有蛋白稳定剂的病毒运输液。

4. 避免样本间交叉污染。

5. 采集后样本应立即检测，若不能立刻检测，可在2～8℃冷藏过夜保存；长期保存需在-80℃以下冻存，避免反复冻融。

检验方法

1. 试剂准备（试剂准备区）：
(1) 取出试剂盒，所需试剂充分融化后瞬时离心去除管壁液体；
(2) 根据实验所需反应数(n)计算所需试剂量，n=阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数。

2. 样本准备（样本处理区）：使用QIAGEN或Roche公司的RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作见其提供的说明书。

3. 加样：在PCR反应管中分别加入处理好的待测标本RNA各5μL，终体积为25μL/管，盖好PCR反应盖后混匀并瞬时低速离心。阴性和阳性对照则各加5μL相应对照品，终体积同样为25μL/管。

4. PCR过程：将准备好的PCR反应管放置于实时荧光定量PCR仪样品槽，设置相关参数进行PCR扩增。反应体积为25μL，FAM通道收集SIV病毒荧光信号。

结果解释

在FAM通道中检测到SIV病毒的结果将解释为阳性，未检出则为阴性。

实验局限性

1. 检测样本中核酸浓度低于最低检出限可能导致假阴性结果。

2. 样本在采集、运输以及处理过程中操作不当可能导致RNA降解，从而产生假阴性。

3. 样本在处理或运输中发生交叉污染会导致假阳性结果。

管理注意事项

尊龙凯时建议使用本试剂盒的实验室，需严格遵循国家相关基因扩增检验实验室管理规范。样本处理应在0-4℃条件下进行，实验后需立即检测，所有操作时需避免样本交叉污染。使用器械和耗材必须经过无核酶处理，并定期消毒实验环境以保障实验安全与结果准确。